Антигены вируса простого герпеса пцр кровь в инвитро. Определение антигенов вируса простого герпеса в крови что это Антиген впг 1.2 типа определение днк вируса

Общая информация об исследовании

Оба типа простого герпеса (HSV 1/2) относятся к ДНК-содержащим оболочечным вирусам. Они являются самыми распространенными вирусными патогенами и способны вызывать целый спектр заболеваний, в том числе простой пузырьковый лишай ("лабиальный герпес", HSV-1, и "генитальный герпес", HSV 1/2), гингивостоматит и кератоконъюнктивит, а также более тяжелые состояния (энцефалит, диссеминированную герпетическую инфекцию новорождённого). В структуре оболочки HSV 1/2 обнаружены белковые молекулы, обладающие специфическими для этого возбудителя вирулентными и антигенными свойствами (ngB, ngC, ngD и другие). В лабораторной диагностике эти антигены используются для идентификации HSV 1/2. Один из методов их выявления – иммунофлюоресценция.

Иммунофлюоресценция (ИФ) – это иммуногистохимическое исследование, позволяющее выявить антиген возбудителя в образце биоматериала. Она основана на взаимодействии антигена HSV 1/2 и специфического для него антитела, маркированного флюоресцентным красителем (флюорохромом), а также на регистрации флюоресценции при изучении биоматериала в ультрафиолетовом свете. Метод позволяет получить результат в более короткие сроки, чем выделение вируса в культуре клеток, а также характеризуется большей точностью по сравнению с другим распространенным анализом – пробой Цанка с окраской по Райту – Гимзе.

Чувствительность ИФ зависит от стадии герпес-вирусной инфекции. Наиболее точный результат будет получен при анализе отделяемого из везикул и "свежих" эрозий. При этом чувствительность теста составляет около 70 %. Обнаружение вируса с помощью ИФ менее вероятно, если отделяемое получено из язвенных дефектов, пустулезных элементов или корок. По этой причине для диагностики герпес-вирусной инфекции с помощью ИФ рекомендуется повторное (многократное) взятие биоматериала. Также чувствительность теста максимальна при взятии отделяемого при самых первых высыпаниях и значительно снижается через 72 часа (составляет 19 %). Наибольшая чувствительность достигается при исследовании образцов, полученных из элементов "генитального герпеса", по сравнению с элементами другой локализации. Необходимо также отметить, что чувствительность теста снижается при анализе биоматериала, взятого на фоне лечения противовирусными препаратами. Учитывая эти особенности, интерпретировать отрицательный результат следует с учетом клинической картины и некоторых других лабораторных данных.

ИФ характеризуется достаточно высокой специфичностью (96-99 %). Это означает, что положительный результат теста позволяет с уверенностью подтвердить диагноз "герпес-вирусная инфекция".

ИФ может быть с успехом применена при обследовании пациентов из группы риска по герпес-вирусной инфекции (например, пациентов, имеющих несколько половых партнеров) и с ее симптомами. Наоборот, не следует использовать метод ИФ при обследовании пациентов без факторов риска (например, девочек препубертатного возраста) и пациентов с бессимптомной инфекцией HSV1/2. Учитывая распространенность бессимптомной инфекции HSV1/2 среди беременных, данный анализ не рекомендован для обследования планирующих беременность и беременных без клинических признаков генитального герпеса.

При подтверждении диагноза "генитальный герпес" с помощью ИФ также рекомендуется обследование на другие инфекции, передаваемые половым путем (гонорею, трихомониаз, хламидиоз и др.). Кроме того, следует обследоваться на ИППП всем половым партнерам пациента.

Для чего используется исследование?

Для диагностики:

• простого пузырькового лишая;
• герпетического гингивостоматита;
• герпетического кератоконъюнктивита.

Когда назначается исследование?

При симптомах:

• "генитального герпеса" у мужчин (сгруппированные везикулезные, эрозивные или язвенные высыпания в области гениталий или бедер, дизурия, дискомфорт в паховой области или промежности);
• "генитального герпеса" у женщин (к описанным симптомам добавляются слизистые выделения из влагалища и диспареуния);
• герпетического кератоконъюнктивита (острое начало болезни, слезотечение, светобоязнь, блефароспазм, инъекции сосудов склеры, интенсивная боль в области пораженного глаза);
• герпетического гингивостоматита (острое начало болезни, лихорадка, отек и эритема десен, болезненная шейная лимфаденопатия, а также везикулезные высыпания в ротовой полости и на коже периоральной области).

Data 02 Авг ● Comments 0 ● Views

Врач   Мария Николаева  

После заражения герпетической инфекцией вирус встраивается в структуру ДНК нервной системы. В отсутствии заболеваний и иных факторов, ослабляющих иммунитет, возбудитель не несёт опасности для организма. Однако перед беременностью, а также лицам с иммунодефицитом, необходимо провести анализ на ВПГ (вирус простого герпеса). В первом случае возбудитель способен нарушить внутриутробное развитие ребёнка, во втором - вызвать тяжёлые болезни внутренних органов.

Анализ на вирус простого герпеса 1 и 2 типа (HSV 1 и 2) проводится несколькими способами. К подобным исследованиям прибегают в следующих случаях:

• заболевание протекает без выраженных признаков (особенно важно проводить диагностику инфекций, когда идёт развитие генитального герпеса);
• у женщин, планирующих беременность, ранее не проявлялись признаки герпеса на слизистой оболочке половых органов или на других участках тела;
• частые рецидивы герпеса;
• частые обострения хронических заболеваний;
• бесплодие и иные болезни органов репродуктивной системы неустановленной этиологии.

Анализы на герпес

Сдать анализ на антитела к ВПГ 1 и 2 потребуется в обязательном порядке как до, так и после зачатия. Объясняется это тем, что в отсутствии вируса в организме контакт с носителем возбудителя болезни приводит к заражению не только матери, но и будущего ребёнка. Первичная инфекция во время беременности провоцирует нарушения в развитии или гибель плода. Кроме того, чтобы избежать заражения новорождённого во время родов, рекомендуется провести анализ крови на ВПГ 2. В случае если результаты исследования покажут наличие герпеса этого типа, нередко назначают кесарево сечение.

Обнаружить ВПГ можно с помощью следующих методов:

1. Полимеразная цепная реакция (ПЦР). Этот анализ крови на вирус герпеса 1 и 2 типа способен выявить наличие ДНК вируса в организме человека.
2. Иммуноферментный анализ (ИФА). Метод основан на выявлении иммуноглобулинов, которые организм вырабатывает после заражения ВПГ. ИФА помогает диагностировать вирус, даже если инфицирование было давно.

В случае если проведённый анализ на герпес 1 и 2 типа не дал точного результата, применяется реакция иммунофлюоресценции (РИФ). Данный метод также предусматривает исследование крови, взятой у пациента.

Если герпес часто проявляется на губах, необходимо оценить состояние иммунной защиты, для чего назначается иммунограмма. В тяжёлых ситуациях применяется биохимический анализ крови, с помощью которого выявляются нарушения в работе внутренних органов. Этот метод особенно актуален в случаях обострения генитальной инфекции.

Полимеразная цепная реакция

ПЦР-диагностика проводится с помощью жидкости, взятой из пузырьковой сыпи, или соскобов со слизистых оболочек. Это исследование наиболее результативно непосредственно после инфицирования. Определение ДНК методом ПЦР проводится с целью диагностирования типа вируса.

Эффективность полимеразной цепной реакции объясняется тем, что организм после заражения вырабатывает антигены к ВПГ, которые выявляются в исследуемом материале.

ПЦР анализ – что это такое

Подготовка к процедуре

Диагностику инфекций проводят в лаборатории. Прежде чем сдать материал на ПЦР, пациенту необходимо:

• в течение 3-4 дней избегать половых контактов;
• за неделю отказаться от спринцевания и использования вагинальных свечей;
• отказаться от посещения бань, саун, бассейнов;
• не потреблять алкогольные напитки, жареные и солёные продукты;
• по возможности ограничить приём медикаментов.

Полимеразная цепная реакция не проводится в период острого течения инфекционных заболеваний, после сильного переутомления или стресса. Каждый из приведённых факторов может повлиять на результаты исследования.

Результаты

Анализ на выявление антигенов вируса простого герпеса позволяет оценить концентрацию частицы возбудителя во взятом материале. В случае если исследование дало положительный результат, говорят о наличии инфекции в организме. В подобных ситуациях назначается лечение противовирусными препаратами либо корректируется проводимая терапия.

Когда исследование даёт результат с отрицательным значением, то процедуру необходимо повторить. Если и следующий анализ не выявил наличие антигенной нагрузки, то противовирусное лечение не проводится.

ПЦР - ни одна инфекция не останется не обнаруженной

Биопсия как дополнение ПЦР

Важная особенность ПЦР заключается в том, что результаты анализов на герпес 1 и 2 типов будут положительны при условии наличия вируса в собранном материале. Однако со временем концентрация возбудителя в отделяемых жидкостях снижается. При этом сохраняется воспаление тканей органов репродуктивной системы.

Этот процесс развивается из-за того, что вирус герпеса меняет иммунный ответ, и организм начинает атаковать собственные клетки. В итоге полимеразная цепная реакция не даёт положительный результат при хроническом течении заболевания. В подобных обстоятельствах менее информативным становится анализ на антитела класса М и G к вирусу простого герпеса (ИФА).

В таких условиях назначается провокационный тест, в рамках которого пациенту назначается приём «Пирогенала» или других препаратов, после чего исследуется кровь на предмет обнаружения частиц возбудителя.

Дополнительно проводится биопсия тканей органов, которые, как предполагает врач, поражены герпесом. Материал забирается из полости матки, предстательной железы или других отделов репродуктивной системы.

Цитопатические изменения клеток герпес определяются посредством обработки взятых образцов формалином и парафином. Вирус, встраиваясь в организм, повреждает ткани изнутри. Поэтому, если в ходе исследования выявляются изменённые ядра и цитоплазма клеток, диагностируется наличие герперовируса. Кроме того, соответствие норме лейкоцитов в мазке также указывает на инфицирование данным возбудителем.

Иммуноферментный анализ

После заражения герперовирусом организм человека вырабатывает особые белки (антитела), которые подавляют активность инфекции. Эти иммуноглобулины разносятся по телу и начинают бороться с возбудителем в зонах, в которые тот «спускается».

Выделяют несколько классов антител, которые выявляются с помощью иммуноферментного анализа:

1. IgM. Антитела этого типа формируются в течение первых двух недель после заражения. В случае если ИФА покажет наличие IgM в крови, то говорят о недавнем инфицировании либо об обострении герпеса. Со временем концентрация этих антител постепенно снижается.
2. IgG. Антитела появляются спустя некоторое время после заражения (примерно на 12-16 день). Как и в случае с IgM концентрация IgG повышается при рецидивах заболевания.
3. IgG к предранним белкам герперовируса. Эти антитела также возникают во время обострения болезни.

В рамках иммуноферментного анализа оценивается авидность иммуноглобулинов IgG. Данный показатель определяет способность антител связываться с вирусными частицами. При обострении болезни авидность низкая. По мере прогрессирования герпеса показатель постепенно повышается. Авидность помогает уточнить, когда произошел рецидив.

Что такое ИФА

Расшифровка

В расшифровке анализа крови на герпес 1 и 2 типа указывают обычно herpes simplex титр. Исследование даёт следующие результаты:

1. Отсутствие антител IgG и IgM. Пациент не является носителем герпеса.
2. Отсутствие IgM и наличие ранних и поздних IgG. Результат свидетельствует о недавнем заражении (подтверждается с помощью ПЦР) или рецидиве болезни.
3. Наличие только поздних IgG. Результат анализа показывает наличие вируса в организме в латентном состоянии.
4. Наличие IgM и IgG (в том числе и поздних). Результат анализа сообщает о недавнем обострении или заражении.
5. Результаты анализа на авидность расшифровываются следующим образом:
6. 50-60%. Такой результат требует повторного проведения иммуноферментного анализа через 2 недели.
7. Ниже 50%. Показатель свидетельствует о недавнем заражении.
8. Выше 60%. Выявлен хронический герпес.

В случае если результат исследования окажется положительным, то пациенту необходимо обратиться к терапевту (дерматологу) при герпесе, локализующемся на теле, или гинекологу (урологу) - на половых органах.

Реакция иммунофлюоресценции

Эффективность РИФ напрямую зависит от уровня концентрации вируса в собранном материале. Суть метода сводится к следующему: в кровь вводятся специальные красящие вещества, в состав которых включают антитела к герпесу. В случае если в организме присутствует возбудитель, последний вступает в химическую реакцию. Красящие вещества подсвечивают вирусные частицы под микроскопом.

РИФ для выявления герпеса применяется редко. Объясняется это высокой чувствительностью метода к различным инфекциям. Поэтому, если в организме человека присутствуют другие вирусные частицы, результат РИФ окажется ложноположительным.

Другие методики

Иногда для выявления герпеса в организме применяется культуральный метод, в рамках которого производится забор клеток. Последние затем заражаются вирусными частицами, после чего оценивается характер протекающих процессов.

При необходимости назначаются аллергопробы, которые исключают или подтверждают наличие у пациента повышенной чувствительности к определённым раздражителям. Данная процедура проводится в случаях, когда не удаётся дифференцировать по внешним признакам аллергическую реакцию и обострение герпеса из-за схожести в симптомах.

Список анализов, необходимых для постановки диагноза, составляется индивидуально для каждого пациента. Герперовирусы 1 и 2 типов не создают угрозы для организма. При этом частые проявления инфекции свидетельствуют о резком ослаблении иммунитета. В подобных случаях нужно обращаться к иммунологу.

С этим также читают

Вирус простого герпеса (ВПГ) – ДНК–содержащий вирус Herpes simplex virus семейства Herpesviridae подсемейства Alphaherpesvirinae . Согласно статистическим данным ВОЗ, инфекции, обусловленные ВПГ, занимают второе место по распространенности среди вирусных заболеваний человека. Различают два серотипа ВПГ – ВПГ-1 и ВПГ-2. Оба типа вируса вызывают инфекционные заболевания человека различной степени тяжести от характерных везикулезных или пустулезных высыпаний на коже и слизистых до поражений ЦНС. ВПГ-1 – причина офтальмогерпеса, протекающего в форме кератита или кератоиридоциклита, реже увеита, в единичных случаях - ретинита, блефароконъюнктивита. Заболевание может привести к помутнению роговицы и вторичной глаукоме. ВПГ-1 - основная причина энцефалита у взрослого населения стран умеренного климата, при этом только у 6–10% больных отмечается одновременное поражение кожи.

В ходе проведения эпидемиологических исследований установлено наличие специфических АТ к ВПГ у 90–95% обследуемых лиц среди взрослого населения, при этом первичная инфекция манифестно протекает лишь у 20–30% инфицированных.

ВПГ характеризуется коротким циклом репродукции в клеточных культурах и оказывает сильное цитопатическое действие. Он способен к репродукции в различных типах клеток, чаще персистирует в ЦНС, преимущественно в ганглиях, поддерживая латентную инфекцию с возможностью периодической реактивации. Наиболее часто вызывает кожно-слизистые формы заболевания, а также поражение ЦНС и глаз. Геном ВПГможет интегрироваться с генами других вирусов (включая ВИЧ), вызывая их активацию, также возможен его переход в активное состояние на фоне развития иных вирусных и бактериальных инфекций.

Пути передачи ВПГ: воздушно-капельный, половой, контактно-бытовой, вертикальный, парентеральный. Факторами передачи ВПГ служат кровь, слюна, моча, везикулярный и вагинальный секрет, сперма. Входными воротами являются поврежденные слизистые оболочки и кожа. По периферическим нервам вирус доходит до ганглиев, где сохраняется пожизненно. При активации ВПГ распространяется по нерву к первоначальному очагу поражения (механизм “замкнутого цикла” – циклическая миграция вируса между ганглием и поверхностью кожи). Может происходить лимфогенная и гематогенная диссеминация возбудителя, что особенно характерно для недоношенных новорожденных и лиц с выраженным иммунодефицитом (в т. ч. при ВИЧ-инфекции). ВПГ обнаруживается на лимфоцитах, эритроцитах, тромбоцитах, при проникновении вируса в ткани и органы возможно их повреждение вследствие его цитопатического действия. Сохраняющиеся в течение всей жизни у человека вируснейтрализующие АТ (даже в высоких титрах), хотя и препятствуют распространению инфекции, но не предупреждают рецидивов.

Выделение ВПГ продолжается значительное время при первичном инфицировании (ДНК выявляется в плазме крови в течение 4–6 недель), при рецидивах – не более 10 дней. Формирование противогерпетического иммунитета происходит как при манифестном, так и при бессимптомном течении инфекции. При первом контакте АГ с клетками иммунной системы в течение 14–28 дней формируется первичный иммунный ответ, который у иммунокомпетентных лиц проявляется образованием интерферонов, выработкой специфических АТ (вначале – IgM, впоследствии – IgA и IgG), повышением активности естественных киллеров – NK-клеток и формированием мощного пула высокоспециализированных киллеров. В случае реактивации или реинфекции возникает повторный контакт клеток иммунной системы с АГ, образуются АТ и Т-киллеры. Реактивация сопровождается продукцией АТ IgM (редко даже при наличии типичных высыпаний), АТ IgА (чаще) и IgG.

ВПГ (преимущественно ВПГ-2) вызывает генитальный герпес – хроническое рецидивирующее заболевание. Клинические проявления первичного эпизода инфекции, вызванной разными типами вируса сходны, однако инфекции, вызванной ВПГ-2, в гораздо большей степени свойственен рецидивирующий характер. Передача вируса происходит при половых контактах, очаг инфекции локализуется на слизистой и коже половых органов и перигенитальной зоны. Размножение вируса в клетках эпителия приводит к образованию очага сгруппированных пузырьков (папул, везикул), в которых содержатся вирусные частицы, сопровождается покраснением, зудом. Первичный эпизод протекает острее (обычно с симптомами интоксикации), чем последующие рецидивы. Часто возникают симптомы дизурии, признаки эрозии шейки матки.

На ранних стадиях ВИЧ-инфекции течение заболеваний, вызванных ВПГ-1 или ВПГ-2, короткое и типичное. Частым признаком углубления иммуносупрессии и перехода латентной стадии ВИЧ-инфекции в стадию вторичных заболеваний служит развитие опоясывающего лишая. Наличие стойких глубоких вирусных поражений кожи, повторный или диссеминированный опоясывающий лишай, локализованная саркома Капоши - одни из клинических критериев стадии вторичных заболеваний ВИЧ-инфекции. У больных с количеством CD4+-клеток менее 50 клеток/мкл отсутствует тенденция к самостоятельному заживлению эрозивно-язвенных дефектов. Частота герпетического энцефалита среди поражений ЦНС при ВИЧ-инфекции - около 1–3%. У больных СПИДом с наличием глубокого иммунодефицита заболевание нередко протекает атипично: болезнь начинается подостро и медленно прогрессирует до тяжелейших проявлений энцефалита.

Герпетическая инфекция даже при бессимптомном течении способна вызвать целый ряд патологий у беременной и новорожденного. Наибольшую угрозу репродуктивной функции представляет генитальный герпес, который в 80% случаев обусловлен ВПГ-2 и в 20% – ВПГ-1. Бессимптомное течение чаще имеет место у женщин и более типично для ВПГ-2, чем для ВПГ-1. Первичное инфицирование или рецидивы во время беременности наиболее опасны для плода, поскольку могут привести к самопроизвольному выкидышу, гибели плода, мертворождению, порокам развития. Заражение плода и новорожденного чаще отмечается при бессимптомном течении генитального герпеса, чем при клинически выраженном типичном течении. Новорожденный может приобрести герпетическую инфекцию внутриутробно, во время родов (в 75–80% случаев), либо постнатально.

ВПГ-2 может проникать в полость матки через цервикальный канал с поражением плода в 20–30% случаев; трансплацентарное инфицирование может происходить в 5–20% случаев, инфицирование во время родов – в 40% случаев. Возможна передача вируса при выполнении медицинских процедур. При типичных клинических проявлениях диагноз герпетической инфекции трудностей не представляет, тогда как при атипичных формах верифицируется на основании результатов лабораторных исследований, при этом приоритетными должны быть исследования, направленные на выявление маркеров текущей (активной) инфекции. Активация инфекционного процесса при герпетической инфекции, даже при наличии клинических проявлений в стадии обострения, редко сопровождается выработкой АТ-ВПГ IgM (чаще – при первичной инфекции либо реинфекции), как правило, при этом отмечают появление АТ-ВПГ IgА.

Целесообразными являются диагностические исследования для обнаружения ВПГ или его маркеров при наличии в анамнезе пациента указаний на рецидивирующую инфекцию либо на дебют герпетической инфекции в период беременности.

Дифференциальная диагностика. При наличии инфекционного синдрома (длительный субфебрилитет, лимфаденопатия, гепато- или гепатоспленомегалия) – токсоплазмоз, цитомегаловирусная инфекция и инфекция, вызванная ВЭБ; контактный дерматит, инфекционные заболевания, сопровождающиеся везикулезными высыпаниями на коже и слизистых оболочках (ветряная оспа, опоясывающий герпес, пиодермия и др.); эрозивно–язвенные поражения гениталий, обусловленные Treponema pallidum, Haemophilus ducreyi; болезнь Крона, синдром Бехчета, фиксированная токсикодермия, менингоэнцефалиты и менингиты неясной этиологии, увеиты и кератоконъюнктивиты неясной этиологии).

Показания к обследованию

• Планирование беременности;
• женщины, имеющие в анамнезе либо на момент обращения типичные герпетические высыпания любой локализации, в т. ч. рецидивирующий генитальный герпес, или наличие пузырьковых и/или эрозивных высыпаний на коже, ягодицах, бедрах, слизисто–гнойные выделения из влагалища;
• наличие полового контакта с партнером, имеющим генитальный герпес;
• атипичная форма заболевания: отсутствие зуда или жжения, отсутствие везикул, веррукозные узелки; обширные кожные поражения (до 10% случаев предполагаемого опоясывающего герпеса обусловлено не ВЗВ, а ВПГ);
• женщины с отягощенным акушерским анамнезом (перинатальные потери, рождение ребенка с врожденными пороками развития);
• беременные женщины (в первую очередь имеющие УЗИ-признаки внутриутробной инфекции, лимфоаденопатии, лихорадку, гепатит и гепатоспленомегалию неясного генеза);
• дети с признаками внутриутробной инфекции, врожденными пороками развития или наличием на коже или слизистых оболочках везикул или корочек;
• дети, рожденные от матерей, перенесших генитальный герпес во время беременности;
• ациенты (в первую очередь новорожденные) с сепсисом, гепатитами, менингоэнцефалитом, пневмонией, поражением глаз (увеит, кератит, ретинит, ретинальный некроз), поражением ЖКТ.

Материал для исследования

• Содержимое пузырьков/везикул со слизистых оболочек и кожи половых органов мужчин и женщин – микроскопические исследования, культуральные исследования, выявление АГ, выявление ДНК;
• мазки (соскобы) со слизистых оболочек цервикального канала, уретры (при отсутствии видимых пузырьковых высыпаний или эрозивно-язвенных поражений) – выявление ДНК;
• сыворотка крови, СМЖ (по показаниям) – выявление АТ.

Этиологическая лабораторная диагностика включает микроскопическое исследование, выделение и идентификация вируса в культуре клеток, выявление АГ или ДНК возбудителя, определение специфических АТ.

Сравнительная характеристика методов лабораторной диагностики (вирус простого герпеса - анализ). Среди методов лабораторной диагностики “золотым стандартом” долгое время считали выделение ВПГ в культуре клеток из крови, СМЖ, содержимого везикулезных или пустулезных высыпаний и других локусов (носоглотки, конъюнктивы, уретры, влагалища, цервикального канала). Данный метод предполагает изоляцию вируса при заражении биологическим материалом чувствительных культур клеток с его последующей идентификацией. К неоспоримым преимуществам метода относятся: возможность определения активности инфекции при наличии клинических проявлений и проведения типирования вируса, а также установления чувствительности к противовирусным препаратам. Однако длительность анализа (1–8 дней), трудоемкость, высокая стоимость и необходимость определенных условий проведения исследований затрудняет применение данного метода для рутинной лабораторной диагностики заболевания. Чувствительность достигает 70–80%, специфичность – 100%.

Материал с поверхности высыпаний может быть использован для микроскопических (окраска препаратов по Романовскому–Гимзе) или цитологических (окраска препаратов по Тцанку и Папаниколау) исследований. Названные процедуры имеют низкую диагностическую специфичность (не позволяют дифференцировать ВПГ от других герпес-вирусов) и чувствительность (не более 60%), поэтому не могут считаться надежными методами диагностики.

Выявление АГ ВПГ в крови, СМЖ, содержимом везикулезных или пустулезных высыпаний и других локусов (носоглотки, конъюнктивы, уретры, влагалища, цервикального канала) проводят методами РИФ и РНИФ с использованием моноклональных или высокоочищенных поликлональных АТ. При использовании метода ИФА чувствительность исследования возрастает до 95% и более, специфичность при манифестном герпесе варьирует от 62 до 100%. Однако большинство наборов реагентов для выявления антигена ВПГ методом ИФА не позволяют провести дифференцирование серотипов вируса.

Обнаружение ДНК ВПГ-1 и/или ВПГ-2 при использовании ПЦР в различном биологическом материале превосходит чувствительность обнаружения ВПГ при использовании вирусологического исследования. Выявление ВПГ в соскобах со слизистых оболочек полости рта, урогенитального тракта, в отделяемом пузырьковых высыпаний (везикул) и эрозивно–язвенных поражений кожи с помощью ПЦР является методом выбора. Несомненную ценность имеет определение количества ДНК ВПГ методом ПЦР в режиме реального времени, результаты исследования можно использовать как с диагностической целью, так и для оценки эффективности лечения.

Для выявления АТ к ВПГ разных классов IgА, IgG, IgM, суммарных к антигенам ВПГ обоих типов или типоспецифичных, применяют методы РНИФ или ИФА, для определения авидности АТ IgG – метод ИФА. Наибольшее диагностическое значение имеет детекция АТ IgM как показателя активности процесса, их выявление может свидетельствовать об остром заболевании, реинфекции, суперинфекции или реактивации. Однако в клинически выраженных случаях, в т. ч. при типичном течении генитального или неонатального герпеса, специфические АТ IgM выявляются редко (в 3–6% случаев). Определение авидности АТ-ВПГ IgG несет низкую информационную нагрузку: реактивация при клинически выраженных случаях сопровождалась наличием высокоавидных АТ. Тест на выявление АТ-ВПГ IgА является методом выбора наряду с определением ДНК либо АГ ВПГ при определении активности инфекционного процесса.

Показания к применению различных лабораторных исследований. Определение АТ целесообразно проводить для подтверждения первичной инфекции, а также установления диагноза у пациентов с бессимптомным и атипичным течением заболевания.

У беременных женщин (скрининг) целесообразно проведение исследований для выявления АТ-ВПГ IgМ, а также выявление АТ-ВПГ IgА. Для беременных высокого инфекционного риска дополнительно рекомендуется определение ДНК и АГ ВПГ в лейкоцитарной взвеси или в материале из предполагаемого очага.

При подозрении на внутриутробную инфекцию рекомендуется выявление ДНК вируса в пуповинной крови, у новорожденных – детекция ДНК вируса в различных биологических пробах (отделяемое пузырьковых высыпаний (везикул) эрозивно– язвенных поражений кожи и слизистых оболочек, ротоглотки, конъюнктивы; периферическая кровь, СМЖ, моча и др.), а также определение АТ-ВПГ IgМ и IgА в крови. Учитывая высокую диагностическую значимость определения ДНК вируса методом ПЦР и наличие зависимости между летальностью у новорожденных и виремией, вызванной ВПГ, некоторые исследователи рекомендуют использовать этот метод для лабораторного скрининга генерализованной герпетической инфекции детей, относящихся к группе высокого риска.

Выявление АГ-ВПГ в различных биологических пробах предлагается применять в качестве экспресс-тестов для дифференцирования типов вируса при скрининге популяций с высоким уровнем заболеваемости, а также при мониторинге заболевания.

У больных ВИЧ-инфекцией с атипичными клиническими проявлениями кожных поражений в диагностике отдается предпочтение выявлению ДНК ВПГ методом ПЦР как самому чувствительному методу лабораторной диагностики.

Особенности интерпретации результатов. Обнаружение вирусоспецифических АТ IgM может свидетельствовать о первичной инфекции, реже – о реактивации или реинфекции, выявление АТ-ВПГ IgА – об активности инфекционного процесса (затяжное течение при дебюте герпетической инфекции, реинфекции или реактивации). О врожденной инфекции (неонатальный герпес) свидетельствует присутствие АТ-ВПГ IgM и(или) IgА. Выявление АТ IgG отражает латентную инфекцию (инфицирование).

Выявление ДНК ВПГ свидетельствует о наличии активной (репликативной) стадии вирусной инфекции с учетом выраженности клинических проявлений. Выявление ДНК ВПГ-1 и/или ВПГ-2 методом ПЦР позволяет при однократном тестировании установить факт внутриутробного инфицирования плода; при проведении обследования в первые 24–48 ч после рождения лабораторно подтвердить врожденную инфекцию, вызванную ВПГ.

Диагностическое значение (специфичность и чувствительность) обнаружения ДНК ВПГ в СМЖ у больных ВИЧ-инфекцией с поражением ЦНС окончательно не установлены. Возможно, для подтверждения герпетической этиологии энцефалита необходимо определение концентрации ДНК ВПГ в СМЖ. Исследование для обнаружения ДНК ВПГ в крови малоинформативно в связи кратковременным нахождением ВПГ в сосудистом русле, следовательно, возможно получение отрицательного результата несмотря на развитие клинически выраженного заболевания.

Основным протективным антигеном вируса простого герпеса типа I и II (ВПГ-1, ВПГ-2) является гликопротеин Д (gD), и в меньшей степени - гликопротеин B(gB).
Очищенный gD ВПГ-1 или ВПГ-2 защищает мышей от летальной дозы как ВПГ-1, так и ВПГ-2; стимулирует образование ВН-антител, пассивное введение которых защищает мышей от летальной инфекции ВПГ; стимулирует комплементзависимую и опосредованную антителами цитотоксичность. Комбинация обоих гликопротеинов (gD и gB) усиливает протективную активность препарата. В четырех антигенных участках gD ВПГ-1 различают по крайней мере шесть эпитопов. Антитела к большинству из них нейтрализуют вирус без участия комплемента и подавляют проникновение вируса в клетку. Нейтрализация вируса и индукция протективного иммунитета приводили к активизации гуморальных и клеточных факторов иммунитета у мышей и кроликов, повышали их резистентность к экспериментальному заражению и снижали количество клеток ганглия тройничного нерва, несущих геном вируса. Нейтрализация вируса и индукция протективного иммунитета связаны с аминокислотными остатками 233-259, а адсорбция вируса - с областью в пределах первых 182 аминокислот. Точечные мутации в сайте нейтрализации gD могут сделать его нечувствительным к действию ВН-антител.

Слияние вирусной и клеточной оболочек ВПГ-1 определяет gB. За аналогичные функции вируса Эпштейн-Барра ответственны два гликопротеина (220/200 и 350/300 кД), расположенные на поверхности вириона. Эти белки вызывали у кроликов образование антител, реагирующих с одними и теми же белками на поверхности вирионов и инфицированных вирусом клеток. Вакцина, содержащая гликопротеин 340 кД, вызывала иммунитет у обезьян. В нейтрализации цитомегаловируса и выработке нейтрализующих антител основная роль принадлежит гликопротеинам 86 и 130/55 кД.

В оболочке вируса псевдобешенства (ВПБ) различают три основных гликопротеина (gE, gB, gX), кодируемых u-сегментом вирусного генома. При иммунном ответе свиней на инфекцию защитные антитела формируются к двум гли-копротеинам: gE и gB. Гликопротеин gE состоит из двух субъединиц с массой около 80 кД. Он не является существенным для репликации, поскольку известны вакцинные штаммы с делениями в этой области генома. N-концевой фрагмент gE содержит высокоантигенный домен, способный вызвать образование НВ-антител и защитный эффект. Делеция по гену gE может привести к снижению иммунногенности, чего не наблюдается при удалении гена gX. Предшественники gII и gIII имеют соответственно молекулярную массу 110 и 60 кД. За слияние вирусной и клеточной оболочек и проникновение вируса в клетку ответственен gB. Антигенного дрейфа в gB и gE не обнаружено.

Однако основную роль в индукции синтеза нейтрализующих антител ВПБ, проявляющих активность в отсутствие комплемента, играет gB. Являясь мультифункциональным белком, он, кроме того, играет важную роль в адсорбции и эффективной репликации вируса в культуре клеток. Антитела к gIII обладали более выраженным защитным эффектом у мышей (90-100%) и свиней (84-100%), чем к gII. Гликопротеин gIII играет определяющую роль в клеточном иммунитете, поскольку является главным антигеном-мишенью для вирусспецифических цитотоксических Т-лимфоцитов. Кроме gill, заметная роль в защите вакцинированных животных принадлежит g50 кД, который также является основной мишенью ВН-антител. Следует отметить, что пассивная защита поросят не предотвращала репликацию и экскрецию ВПБ в назофаренгиальной области зараженных животных. Титр нейтрализующих антител in vitro не всегда коррелировал с защитой животных.

Так как все полевые штаммы ВПБ содержат gE, а большинство аттенуированных штаммов, используемых в качестве живых вакцин, не содержат gE, появилась возможность использовать ИФА для дифференциации иммунных и инфицированных животных и тем самым способствовать оздоровлению хозяйств на основе вакцинопрофилактики. Указанная стратегия успешно реализуется в практических условиях в Западной Европе.

За индукцию синтеза ВН-антител герпесвируса типа I крупного рогатого скота (ГВ I) ответственны четыре гликопротеина оболочки. Главными из них являются g70 и g97. Эти гликопротеины содержат основные эпитопы нейтрализации вируса. Гемагглютинирующая активность ГВ крупного рогатого скота связана с мажорным g97, расположенным в шипиках вириона. Главные нейтрализующие эпитопы расположены на гемагглютинирующем домене, что свидетельствует о перспективности использования гемагглютинирующего антигена ГВ 1 крупного рогатого скота для приготовления субъединичной вакцины, 15381. ГВ1 крупного рогатого скота так же, как герпесвирус типа I кошек (ГВК1), агглютинирует эритроциты мышей, хотя гемагглютинирующие домены этих вирусов не идентичны.

В структуре gIV ГВ1 крупного рогатого скота идентифицированы три нейтрализующих домена . Домен I содержит два перекрывающихся эпитопа, домен III - четыре идентичных или перекрывающихся эпитопа, домен II - один эпитоп. Домен I имеет отношение к проникновению вируса в клетки-мишени. Прикрепление вируса к клеткам in vitro опосредовано его главными гликопротеинами, которые в этом отношении можно расположить в ряду gill > gl > gIV. Очищенный gIII полностью блокирует адсорбцию полевого штамма ГВ1 крупного рогатого скота.

В становление гуморального и клеточного иммунитетов свой вклад вносят гликопротеины оболочки gI gIII и особенно gIV. Максимальную защиту телят в экспериментальных условиях обеспечивал gIV, а также безвирусный лизат инфицированных клеток.

Нейтрализующие антитела к трем оболочечным гликопротеинам (gI, gIII и gIV) FBI крупного рогатого скота вводили телятам и определяли защитный эффект при экспериментальном заражении гомологичным вирусом. У привитых животных титры антител в носовом секрете и смывах с конъюнктивы были аналогичны таковым у реконвалесцентов. Несмотря на клинический эффект от введения антител, они не предотвращали размножение ГВ1 крупного рогатого скота в слизистой оболочке носа и глаз, а также не сокращали его экскрецию. Цитотоксические Т-лимфоциты крупного рогатого скота, индуцированные ГВ1 крупного рогатого скота, проявляют специфичность, то есть реагируют только на клетки, экспрессирующие гомологичный или родственный антиген. Мутант ГВ1 крупного рогатого скота с делецией гена gIII не теряет способности размножаться в культуре клеток. Его функциональная дефектность проявляется в замедленной адсорбции и репликации, а также в снижении выхода внеклеточного вируса. По аналогии с вирусом псевдобешенства идентифицированы и делетированы несущественные гены с целью получения аттенуированных «маркированных» вакцин.

1. Менее 0,9 – отрицательный результат.
2. В промежутке от 0,9 до 1,1 – сомнительный результат. Возможно, заражение было недавно, заболевание находится в инкубационной стадии.
3. Значение от 1,1 и выше – положительный результат.

При сомнительном результате необходимо сдать кровь еще раз через 10-14 суток.

Положительный результат

Если показатель антител IgG превышает отметку в 1,1 — результат положительный, в крови присутствует ВПГ. На какой стадии развития находится заболевание, есть ли риск инфицирования плода при беременности, рассматривается по уровню антител IgM.

Значения положительного анализа igg и их расшифровка:

1. IgM имеет отрицательное значение – IgG положительное: организм заражен. Инфицирование было давно, заболевание находится в латентной стадии. Данная интерпретация результата анализа говорит о том, что риски инфицирования плода в период беременности отсутствуют, так как в крови матери есть антитела, что защитят ребенка от инфекции. Повторить анализ в случае появления симптоматической картины герпеса – множественных высыпаний на слизистых оболочках.
2. Отрицательные IgM и IgG : отсутствие вируса в крови. Но его наличие не исключается. Антитела формируются первые 14 дней после попадания HSV в кровь. Если с момента инфицирования прошло менее 2 недель, анализ это не выявит. Рекомендуется сделать повторный тест через 14-20 дней. В обязательном порядке сдать повторный анализ при появлении симптоматической картины ВПГ.
3. IgM положительный – IgG отрицательный : инфицирование произошло не более 2 недель назад. Заболевание находится в острой стадии, наличие симптоматической картины необязательно. Если данный результат получен во время беременности, в срочном порядке проводится соответствующее лечение, так как риск занесения инфекции к плоду очень велик.

Действия при положительном результате:

1. Если вирус обнаружен до беременности, проводится соответствующее лечение . Рекомендованные сроки зачатия ребенка с отсутствием рисков его инфицирования – через 2-4 месяца после терапии при отсутствии симптоматической картины вируса простого герпеса.
2. При обнаружении HSV после зачатия ребенка, проводится ультразвуковое обследование плода на предмет соответствия его развития сроку беременности. При обнаружении аномалий развития рекомендовано медикаментозное прерывание беременности на ранних сроках. В случае нормального развития ребенка в утробе матери проводится противовирусное лечение с индивидуальным подбором препаратов и их дозировки.

Положительное значение антител IgM у беременной девушки говорит об остром течении заболевания. ВПГ увеличивает риск мертворождения, аномалий физического, или умственного развития.

После того, как анализ покажет отрицательное значение IgM, повторная сдача через 3 месяца.

Вылечить герпес не представляется возможным. Попав в организм один раз, патогенные клетки оседают в спинном мозге в крестцовом отделе. Под влиянием провоцирующих факторов, вирус переходит в активную стадию, проявляется симптоматическая картина.

Терапия противовирусными препаратами направлена на купирование признаков болезни и подавление патогенного вируса. Для предупреждения рецидива необходимо соблюдать профилактические мероприятия – не допускать переохлаждения, своевременно лечить инфекционные и воспалительные заболевания.

Заключение

Избежать заражения ВПГ 1 типа невозможно, так как у носителя вируса заболевание может не иметь ярко выраженной симптоматической картины. Профилактика 2 типа заболевания – разборчивые половые связи и использование презервативов.

Сдача анализа – обязательная мера при ношении ребенка в утробе (в идеале – при планировании зачатия), чтобы избежать тяжелых осложнений. При отрицательном результате женщине необходимо соблюдать врачебные рекомендации касательно предупреждения инфицирования.

Если результат анализа igg положительный – немедленное лечение противовирусными препаратами с дальнейшим мониторингом состояния плода ультразвуковой диагностикой и регулярной сдачей лабораторного анализа, неукоснительное соблюдение профилактических мероприятий для предупреждения обострения болезни. В случае появления высыпаний на половых органов в третьем триместре необходимо немедленно .